Plasmide CRISPR/Cas9 KO Filensin (m): sc-419323

Présentation

Bfsp1 code la filensine, une protéine de filament intermédiaire enrichie dans les cellules des fibres du cristallin, qui s’hétéropolymérise avec la phakinine (BFSP2) pour former des filaments perlés. Ce réseau cytosquelettique soutient l’architecture des fibres du cristallin, contribue à la formation de la zone dépourvue d’organites lors de la différenciation terminale et aide à maintenir la transparence réfractive en stabilisant les interactions membrane–cytosquelette. La perturbation de l’assemblage des filaments perlés altère la biomécanique du cristallin et la protéostase, reliant ainsi les défauts filamenteux associés à BFSP1 à des phénotypes liés à la cataracte et à des voies plus larges qui contrôlent l’organisation du cytosquelette, l’agrégation protéique et les réponses cellulaires au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Filensin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Bfsp1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Bfsp1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Bfsp1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Filensin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Bfsp1 pour l'étude de la signalisation de Filensin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Bfsp1 essentiels à la fonction de Filensin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Bfsp1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Filensin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Filensin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Bfsp1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Filensin plasmide HDR (m) et le Filensin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Bfsp1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Bfsp1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.