Filamin 1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400557-LAC

Il gene umano **FLNA** codifica la filamina 1, una proteina scaffold legante l’actina che reticola le reti di F-actina e collega il citoscheletro ai recettori di membrana, contribuendo così a modellare l’architettura cellulare, l’adesione e la meccano-trasduzione. La filamina 1 coordina la segnalazione attraverso le integrine e i complessi di adesione focale e modula vie che regolano la migrazione cellulare, l’endocitosi e il rimodellamento del citoscheletro, incluse dinamiche dipendenti dalle GTPasi della famiglia Rho. Attraverso queste interazioni, **FLNA** influenza lo sviluppo dei tessuti e l’integrità vascolare ed è studiato in contesti quali i disturbi della migrazione neuronale, i fenotipi del tessuto connettivo e l’invasione delle cellule tumorali, in cui risultano alterati il rimodellamento dell’actina e la segnalazione recettoriale.

Le particelle di attivazione lentivirale Filamin 1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di FLNA in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Filamin 1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione FLNA, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Filamin 1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo FLNA e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.