Filamin 1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400557-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Filamin 1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Filamin 1 Double Nickase Plasmid (h) e il Filamin 1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira FLNA. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Filamin 1 Antibody (E-3): sc-17749
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Filamin 1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400557-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Filamin 1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400557-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FLNA codifica la filamina 1, una grande proteina scaffold legante l’actina che reticola la F-actina in reti ortogonali e collega il citoscheletro a recettori transmembrana e complessi di segnalazione. Attraverso interazioni con integrine, canali ionici ed effettori regolati da piccole GTPasi, la filamina 1 influenza il turnover delle adesioni focali, la meccanotrasduzione e la polarità cellulare durante la migrazione e l’organizzazione dei tessuti. Il rimodellamento dell’actina corticale dipendente da FLNA supporta l’endocitosi e il traffico vescicolare e contribuisce a coordinare la segnalazione Rho/Rac con la dinamica di membrana. La perdita di funzione o una regolazione alterata di FLNA è associata a disturbi dello sviluppo e neurovascolari ed è spesso oggetto di studio nel contesto della disregolazione del citoscheletro, dell’integrità delle barriere e di fenotipi legati all’invasività.
Filamin 1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FLNA nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FLNA. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FLNA. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FLNA interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.