Fibulin-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401754

Panoramica

FBLN1 codifica la fibulina-1, una glicoproteina secreta della matrice extracellulare che si associa alle membrane basali e alle matrici ricche di fibre elastiche, sostenendo l’architettura dei tessuti e la comunicazione tra cellula e matrice. La fibulina-1 interagisce con molteplici componenti della MEC per influenzare adesione cellulare, migrazione e meccano-trasduzione, collegando l’organizzazione della matrice a programmi di segnalazione che regolano proliferazione e differenziamento. Attraverso queste funzioni, FBLN1 contribuisce all’omeostasi vascolare e dei tessuti connettivi ed è spesso studiato in contesti di rimodellamento quali fibrosi, alterazioni stromali associate all’infiammazione ed evoluzione del microambiente tumorale. Un’espressione o una deposizione alterata della fibulina-1 è stata riportata in numerosi studi cardiovascolari e oncologici, stimolando ricerche meccanicistiche su fenotipi guidati dalla MEC e sulla segnalazione dipendente dalla matrice.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Fibulin-1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FBLN1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FBLN1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FBLN1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Fibulin-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FBLN1 per lo studio della segnalazione di Fibulin-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni FBLN1 critici per la funzione di Fibulin-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FBLN1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Fibulin-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Fibulin-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FBLN1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Fibulin-1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Fibulin-1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FBLN1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FBLN1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.