Plásmido CRISPR de Activación (h) Fibromodulin: sc-401610-ACT

FMOD codifica la fibromodulina, un pequeño proteoglucano secretado rico en leucina, enriquecido en tejidos conectivos, donde se une a colágenos fibrilares y regula la organización de la matriz extracelular. La fibromodulina contribuye a la fibrilogénesis del colágeno, al ensamblaje de la matriz y a la mecanobiología, influyendo en la adhesión celular, la migración y los programas de remodelación tisular. A través de sus interacciones con componentes de la matriz y con la señalización de factores de crecimiento, como las vías asociadas a TGF-β, FMOD puede modular el comportamiento de los fibroblastos y las respuestas del estroma. La alteración de la expresión de FMOD y la remodelación de la matriz se asocian con fenotipos fibróticos y con la dinámica del microambiente tumoral, lo que lo convierte en un objetivo útil para estudiar mecanismos de enfermedad impulsados por la MEC.

Fibromodulin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FMOD sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Fibromodulin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FMOD en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FMOD, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Fibromodulin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FMOD y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Fibromodulin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Fibromodulin en células tumorales con expresión de FMOD silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.