Fibrillarin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400741

Panoramica

FBL codifica per la fibrillarina, una metiltransferasi nucleolare essenziale che catalizza la metilazione 2′-O del ribosio del pre-rRNA all’interno dei complessi snoRNP box C/D, sostenendo la biogenesi dei ribosomi e la capacità traduttiva. La fibrillarina contribuisce alla maturazione del pre-rRNA, all’organizzazione del nucleolo e al coordinamento delle modificazioni dell’RNA con la crescita cellulare e le risposte allo stress. Alterazioni dell’omeostasi nucleolare e della produzione ribosomiale sono caratteristiche ricorrenti di patologie proliferative e neurosviluppo-correlate, e la disregolazione di FBL è stata associata a cambiamenti nei programmi di processamento dell’RNA e nella fitness cellulare. La fibrillarina è anche un autoantigene ben caratterizzato nelle malattie autoimmuni sistemiche, collegando la biologia degli RNP nucleolari al riconoscimento immunitario.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Fibrillarin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FBL in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FBL insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FBL a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Fibrillarin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FBL per lo studio della segnalazione di Fibrillarin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni FBL critici per la funzione di Fibrillarin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FBL per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Fibrillarin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Fibrillarin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FBL. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Fibrillarin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Fibrillarin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FBL per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FBL definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.