FHR-1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-416510-LAC

CFHR1 codifica la proteina 1 correlata al fattore H del complemento (FHR-1), un regolatore secreto della via alternativa del complemento che si lega a C3b/C3d e modula l’attività della C3 convertasi su superfici dell’ospite e microbiche. Modellando l’amplificazione del complemento, FHR-1 influenza l’opsonizzazione, la segnalazione infiammatoria e la clearance dei complessi immuni, intersecandosi con la sorveglianza immunitaria innata e l’omeostasi endoteliale. La variazione genetica o l’alterata espressione di CFHR1 è stata associata a un’attività del complemento disregolata, rilevante per patologie renali e vascolari, tra cui la sindrome emolitico-uremica atipica e la degenerazione maculare legata all’età, nonché per forme di autoimmunità guidate dal complemento. La manipolazione sperimentale di CFHR1 supporta studi meccanicistici sulla regolazione del complemento, sulle reti proteiche sieriche e sulla deposizione del complemento sulla superficie cellulare in condizioni infiammatorie.

Le particelle di attivazione lentivirale FHR-1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di CFHR1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale FHR-1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione CFHR1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di FHR-1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo CFHR1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.