FGF-10 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417825-ACT

FGF10 codifica o fator de crescimento de fibroblastos 10 (FGF-10), um ligante parácrino secretado que sinaliza principalmente por meio do FGFR2b para regular a comunicação epitélio–mesênquima durante a organogênese e a homeostase dos tecidos adultos. O FGF-10 ativa vias canônicas de receptores tirosina-quinase, incluindo RAS–MAPK/ERK, PI3K–AKT e a sinalização de PLCγ, para controlar proliferação, migração, sobrevivência e morfogênese ramificada. A sinalização FGF10–FGFR2b desregulada tem sido implicada no desenvolvimento anormal de pulmões e glândulas, na reparação deficiente de feridas e em programas alterados de crescimento epitelial relevantes para doenças congênitas e para a biologia do câncer. Como morfógeno do desenvolvimento e fator de nicho, o FGF-10 é comumente estudado no epitélio das vias aéreas, na biologia das glândulas mamária e salivar e em modelos de sinalização estroma–epitélio.

FGF-10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FGF10 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FGF-10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FGF10 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FGF10, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FGF-10. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FGF10 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FGF-10 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FGF-10 em células tumorais com expressão de FGF10 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.