fetuin-A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419056

Panoramica

Ahsg codifica la fetuina-A, una glicoproteina secreta di origine epatica che circola nel plasma e modula il metabolismo minerale legando calcio e fosfato, limitando la calcificazione ectopica attraverso la formazione di particelle calciproteiche. La fetuina-A influenza anche la segnalazione infiammatoria e l’omeostasi metabolica, includendo effetti su vie collegate al recettore dell’insulina e sull’attivazione dei macrofagi, ed è spesso studiata nel contesto delle risposte sistemiche di fase acuta. Nei modelli murini, livelli alterati di fetuina-A sono stati associati a calcificazione patologica, disfunzione metabolica e rimodellamento tissutale, rendendo Ahsg un nodo utile per analizzare il crosstalk tra secrezione epatica, mineralizzazione della matrice extracellulare e processi dell’immunità innata. La sua localizzazione extracellulare e l’ampia capacità di legame supportano studi su interazioni proteomiche, biologia dei fattori sierici e microambienti predisposti alla calcificazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO fetuin-A (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ahsg in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ahsg insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ahsg a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina fetuin-A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ahsg per lo studio della segnalazione di fetuin-A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ahsg critici per la funzione di fetuin-A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ahsg per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal fetuin-A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal fetuin-A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ahsg. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal fetuin-A Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR fetuin-A (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ahsg per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ahsg definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.