FBXO29 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-433093

Descripción general

Fbxw8 codifica la proteína con dominio F-box FBXO29, un componente de reconocimiento de sustratos de los complejos ligasa E3 de ubiquitina SKP1–CUL1–F-box (SCF) que dirige proteínas específicas hacia su ubiquitinación y su posterior degradación por el proteasoma. Mediante la degradación regulada de componentes de señalización y de reguladores del ciclo celular, FBXO29 contribuye al control de la homeostasis proteica, la proliferación y los programas de diferenciación. Como parte del control de calidad dependiente de ubiquitina, las ligasas de tipo SCF se conectan con vías que modulan la señalización por factores de crecimiento y las respuestas al estrés, lo que hace que la alteración de Fbxw8 sea relevante para estudiar mecanismos de desregulación de la proteostasis observados en el cáncer y en otros trastornos proliferativos o del desarrollo. Por ello, los modelos murinos de Fbxw8 son útiles para definir redes de sustratos de ligasas de ubiquitina y su impacto en los fenotipos celulares.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO FBXO29 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Fbxw8 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Fbxw8 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Fbxw8 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína FBXO29.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Fbxw8 para la investigación de la señalización de FBXO29, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Fbxw8 críticos para la función de FBXO29
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Fbxw8 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido FBXO29 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido FBXO29 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Fbxw8. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR FBXO29 (m) y el plásmido HDR FBXO29 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Fbxw8 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Fbxw8 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.