FBXO29 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-433093

Panoramica

Fbxw8 codifica la proteina F-box FBXO29, una componente di riconoscimento del substrato dei complessi ligasi E3 dell’ubiquitina SKP1–CUL1–F-box (SCF), che indirizza specifiche proteine verso l’ubiquitinazione e la successiva degradazione proteasomiale. Attraverso la degradazione regolata di mediatori della segnalazione e regolatori del ciclo cellulare, FBXO29 contribuisce al controllo dell’omeostasi proteica, della proliferazione e dei programmi di differenziamento. Nell’ambito del controllo di qualità dipendente dall’ubiquitina, le ligasi di tipo SCF si interfacciano con vie che modellano la segnalazione dei fattori di crescita e le risposte allo stress, rendendo le alterazioni di Fbxw8 rilevanti per lo studio dei meccanismi di proteostasi disregolata osservati nel cancro e in altri disturbi proliferativi o dello sviluppo. I modelli murini di Fbxw8 sono quindi utili per definire le reti di substrati delle ligasi dell’ubiquitina e il loro impatto sui fenotipi cellulari.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FBXO29 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Fbxw8 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Fbxw8 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Fbxw8 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FBXO29.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Fbxw8 per lo studio della segnalazione di FBXO29, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Fbxw8 critici per la funzione di FBXO29
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Fbxw8 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FBXO29 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal FBXO29 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Fbxw8. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FBXO29 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR FBXO29 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Fbxw8 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Fbxw8 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.