Fatty Acid Synthase Plasmide Double Nickase (h): sc-400440-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Fatty Acid Synthase Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Fatty Acid Synthase Double Nickase Plasmid (h) e il Fatty Acid Synthase Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira FASN. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Fatty Acid Synthase Antibody (G-11): sc-48357
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Fatty Acid Synthase Plasmide Double Nickase (h) | sc-400440-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Fatty Acid Synthase Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400440-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano FASN codifica la fatty acid synthase, un complesso enzimatico citosolico multifunzionale che catalizza la sintesi de novo del palmitato a partire da acetil-CoA e malonil-CoA utilizzando NADPH. L’attività di FASN sostiene l’omeostasi lipidica fornendo acidi grassi per la biogenesi delle membrane, la palmitoilazione delle proteine e la segnalazione basata su lipidi, collegando lo stato nutrizionale ai programmi di crescita anabolica. Interagisce con vie metaboliche centrali, tra cui lo shuttling citrato–malato–piruvato, la produzione di NADPH e le reti trascrizionali lipogeniche guidate da SREBP, ed è sensibile alla segnalazione di insulina e mTOR. La lipogenesi dipendente da FASN, quando deregolata, è ampiamente studiata nelle malattie metaboliche, nell’infiammazione associata all’obesità, nella steatosi epatica e negli stati proliferativi, in cui un flusso lipidico alterato può rimodellare le risposte cellulari allo stress e l’equilibrio redox.
Fatty Acid Synthase Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FASN nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FASN. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FASN. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FASN interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.