Plásmido CRISPR de Activación (m) Fascin 2: sc-433603-ACT

El gen Fscn2 de ratón codifica Fascina 2, una proteína que agrupa filamentos de actina y organiza haces paralelos de F-actina, además de sostener las protrusiones de membrana, la forma celular y la estabilidad del citoesqueleto. Las proteínas de la familia de las fascin contribuyen a la remodelación de los filamentos de actina, en interacción con la dinámica de adhesión y los procesos asociados a la motilidad, conectando la arquitectura del citoesqueleto con la mecanotransducción y la organización celular polarizada. En contextos sensoriales y epiteliales, Fascina 2 se asocia con estructuras especializadas ricas en actina, por lo que resulta relevante para estudiar el mantenimiento del citoesqueleto y la integridad tisular. La agrupación de actina desregulada y la remodelación mediada por fascin se han implicado en disfunción celular en distintos modelos de enfermedades degenerativas y proliferativas, lo que respalda la investigación de vías dependientes de Fscn2 en sistemas murinos.

Fascin 2 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Fscn2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Fascin 2 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Fscn2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Fscn2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Fascin 2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Fscn2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Fascin 2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Fascin 2 en células tumorales con expresión de Fscn2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.