FAM86A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-427731

Panoramica

Eef2kmt codifica FAM86A, una metiltransferasi proteica che è stata descritta come in grado di modificare il fattore di traduzione eEF2, collegandola al controllo post-traduzionale della funzione ribosomiale e dell’allungamento della traduzione. Regolando l’omeostasi delle proteine associate a eEF2, FAM86A può influenzare i programmi di crescita cellulare, le risposte allo stress e l’adattamento ai cambiamenti nello stato nutritivo ed energetico. L’alterazione delle reti di controllo della traduzione è ampiamente rilevante per fenotipi proliferativi e neurobiologici, rendendo Eef2kmt un bersaglio utile per studi meccanicistici su proteostasi e crosstalk della segnalazione in modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FAM86A (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Eef2kmt in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Eef2kmt insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Eef2kmt a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FAM86A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Eef2kmt per lo studio della segnalazione di FAM86A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Eef2kmt critici per la funzione di FAM86A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Eef2kmt per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FAM86A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal FAM86A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Eef2kmt. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FAM86A Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR FAM86A (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Eef2kmt per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Eef2kmt definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.