FAM72A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-409422

Übersicht

FAM72A kodiert ein auf Wirbeltiere beschränktes Protein, das mit zellzyklusassoziierten Programmen und proliferativen Zuständen in Verbindung steht, mit erhöhter Expression in sich teilenden Zellen und in sich entwickelnden neuronalen Geweben. Obwohl sein molekularer Mechanismus noch nicht vollständig geklärt ist, wird FAM72A mit der Regulation der Genomstabilität und mit DNA-Schadens-assoziierten Prozessen in Zusammenhang gebracht, die an Reaktionen auf Replikationsstress anknüpfen. Transkriptomische und genomische Studien berichten häufig über eine veränderte FAM72A-Expression in mehreren Tumorarten, was mit einer Rolle bei onkogener Proliferation und Linienplastizität vereinbar ist. Diese Beobachtungen machen FAM72A zu einem nützlichen Ziel für die Untersuchung der Zellzykluskontrolle, von Abhängigkeiten in DNA-Reparaturwegen sowie von Biomarkern hochproliferativer Zellpopulationen.

Das FAM72A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des FAM72A-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des FAM72A-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von FAM72A nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FAM72A-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von FAM72A-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FAM72A-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf FAM72A-Exone abzielen, die für die FAM72A-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere FAM72A-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom FAM72A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom FAM72A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des FAM72A-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FAM72A HDR-Plasmid (h) und FAM72A HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von FAM72A-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten FAM72A-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.