FAM20C Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-429814-LAC

Fam20c codifica a FAM20C, uma quinase secretada localizada principalmente no aparelho de Golgi, que fosforila motivos Ser-x-Glu/pSer em uma ampla gama de proteínas extracelulares e secretadas. Essa atividade quinase sustenta a maturação e a função da via secretória, incluindo a fosforilação de proteínas da matriz extracelular e de reguladores da biomineralização, influenciando assim a osteogênese, a formação de dentina e a homeostase tecidual. Em modelos murinos, a função alterada de Fam20c está associada a fenótipos esqueléticos e dentários e tem sido utilizada para investigar redes de sinalização que conectam a composição da matriz à diferenciação celular. Como a FAM20C modifica múltiplos substratos, perturbar sua expressão oferece um ponto de entrada em nível de sistema para programas de fosforilação extracelular e vias de desenvolvimento dirigidas pela matriz.

As Partículas de Ativação Lentivirais FAM20C (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Fam20c numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais FAM20C (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Fam20c, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de FAM20C. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Fam20c e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.