Particules Lentivirales d'Activation (h) FAM20C: sc-406736-LAC

FAM20C code une kinase sécrétée et/ou résidente de l’appareil de Golgi qui phosphoryle des protéines extracellulaires, avec une activité marquée envers les motifs S-x-E/pS présents sur des phosphoprotéines sécrétées qui façonnent la matrice extracellulaire et la biomineralisation. Dans les cellules humaines, la phosphorylation médiée par FAM20C influence la maturation de la voie sécrétoire et la régulation fonctionnelle des protéines matricielles, contribuant à la différenciation ostéogénique, à l’homéostasie minérale de la dentine et de l’os, ainsi qu’à une biologie plus large des tissus conjonctifs. Une altération de la fonction de FAM20C a été associée à des anomalies squelettiques et dentaires et à une perturbation de la gestion du phosphate, et des modifications de l’activité de FAM20C ont été explorées dans des contextes tels que la biologie tumorale et la signalisation cellule–matrice. Ces caractéristiques font de FAM20C un nœud utile pour étudier la régulation des kinases du Golgi, la phosphoprotéomique extracellulaire et les voies de signalisation dépendantes de la matrice.

Les particules d'activation lentivirales FAM20C (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de FAM20C dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales FAM20C (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription FAM20C, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de FAM20C. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif FAM20C ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.