FAM20A Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-409969-LAC

FAM20A codifica una proteina secreta/della via RE–Golgi che agisce come pseudochinasi all’interno della famiglia FAM20 e modula l’attività e il traffico delle chinasi della via secretoria, influenzando la fosforilazione delle proteine extracellulari e i processi legati alla biomineralizzazione. È implicata nella regolazione della formazione dello smalto e dell’omeostasi minerale attraverso effetti sulle proteine della matrice secrete e sulla maturazione associata al Golgi. Alterazioni della funzione di FAM20A sono state associate a fenotipi correlati all’amelogenesi e a disturbi di calcificazione ectopica, rendendola rilevante per studi sulla biologia della mineralizzazione e sulla regolazione della via secretoria. Nei modelli cellulari, FAM20A viene comunemente analizzata per il suo impatto sulla composizione della matrice extracellulare, sulla secrezione proteica e sulle reti di modificazioni post-traduzionali.

Le particelle di attivazione lentivirale FAM20A (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di FAM20A in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale FAM20A (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione FAM20A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di FAM20A. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo FAM20A e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.