EXTL1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h2): sc-409470-LAC-2

O EXTL1 humano codifica a glicosiltransferase 1 semelhante à exostosina, uma enzima associada ao complexo de Golgi implicada na biossíntese e no alongamento de cadeias de heparan sulfato em proteoglicanos, moldando assim a composição da matriz extracelular e a função de correceptor na superfície celular. Por meio do seu papel na montagem do heparan sulfato, o EXTL1 influencia redes essenciais de sinalização, como as vias FGF, WNT e Hedgehog, que dependem da distribuição de ligantes mediada por glicosaminoglicanos e do engajamento de receptores. A desregulação do metabolismo do heparan sulfato, incluindo alterações na atividade do EXTL1, tem sido associada a perturbações em processos de desenvolvimento e a doenças que envolvem comunicação celular anômala e remodelamento da matriz. A edição gênica do EXTL1 ou sua perturbação funcional dá suporte a estudos mecanísticos de sinalização dependente de glicosilação, biologia de proteoglicanos e leituras específicas de vias em modelos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais EXTL1 (h2) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de EXTL1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais EXTL1 (h2) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição EXTL1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de EXTL1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo EXTL1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.