Partículas Lentivirales de Activación (h2) EXTL1: sc-409470-LAC-2

El EXTL1 humano codifica la glicosiltransferasa 1 similar a exostosina, una enzima asociada al aparato de Golgi implicada en la biosíntesis y elongación de las cadenas de sulfato de heparán en los proteoglucanos, contribuyendo así a determinar la composición de la matriz extracelular y la función de correceptor en la superficie celular. A través de su papel en el ensamblaje del sulfato de heparán, EXTL1 influye en redes de señalización clave como las vías FGF, WNT y Hedgehog, que dependen de la distribución de ligandos mediada por glicosaminoglucanos y de su interacción con los receptores. La desregulación del metabolismo del sulfato de heparán, incluida la alteración de la actividad de EXTL1, se ha vinculado con perturbaciones de procesos del desarrollo y con enfermedades que implican comunicación celular anómala y remodelación de la matriz. La edición genética de EXTL1 o su perturbación funcional facilita estudios mecanísticos de la señalización dependiente de la glicosilación, la biología de los proteoglucanos y lecturas específicas de vías en modelos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral EXTL1 (h2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de EXTL1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral EXTL1 (h2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción EXTL1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de EXTL1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo EXTL1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.