EXTL1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h2): sc-409470-LAC-2

L’EXTL1 umano codifica la glicosiltransferasi 1 simile alle exostosine, un enzima associato all’apparato di Golgi implicato nella biosintesi e nell’allungamento delle catene di eparan solfato sui proteoglicani, contribuendo così a modellare la composizione della matrice extracellulare e la funzione dei co-recettori sulla superficie cellulare. Attraverso il suo ruolo nell’assemblaggio dell’eparan solfato, EXTL1 influenza reti di segnalazione chiave come le vie FGF, WNT e Hedgehog, che dipendono dalla distribuzione dei ligandi mediata dai glicosaminoglicani e dall’interazione con i recettori. La disregolazione del metabolismo dell’eparan solfato, inclusa un’alterata attività di EXTL1, è stata collegata a perturbazioni dei processi di sviluppo e a patologie caratterizzate da comunicazione cellulare anomala e rimodellamento della matrice. L’editing del gene EXTL1 o la sua perturbazione funzionale supportano studi meccanicistici sulla segnalazione dipendente dalla glicosilazione, sulla biologia dei proteoglicani e su readout specifici di via in modelli di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale EXTL1 (h2) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di EXTL1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale EXTL1 (h2) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione EXTL1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di EXTL1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo EXTL1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.