Evi-1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-404112-LAC

Il MECOM umano codifica Evi-1, un fattore di trascrizione a dita di zinco che regola programmi di espressione genica controllando l’autorinnovamento delle cellule staminali e progenitrici ematopoietiche, l’impegno di linea e la sopravvivenza cellulare. Evi-1 modula la cromatina e le reti trascrizionali attraverso interazioni con co-regolatori e nodi di segnalazione, incluse le risposte trascrizionali mediate da TGF-β/SMAD e le vie che governano proliferazione e differenziamento. Un’attività deregolata di MECOM/Evi-1 è associata a ematopoiesi aberrante e a una riprogrammazione trascrizionale oncogenica in molteplici contesti di malignità, rendendolo un modello prezioso per studiare la dipendenza dai fattori di trascrizione e i circuiti regolatori. In ambito di ricerca, MECOM è spesso utilizzato per analizzare l’uso degli enhancer, i cambiamenti dello stato epigenetico e i geni bersaglio a valle che indirizzano le decisioni sul destino cellulare.

Le particelle di attivazione lentivirale Evi-1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di MECOM in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Evi-1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione MECOM, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Evi-1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo MECOM e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.