ETAR Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-420111-LAC

Il gene murino **Ednra** codifica il recettore dell’endotelina di tipo A (ETAR), un recettore accoppiato a proteine G (GPCR) che lega preferenzialmente l’endotelina-1 per regolare la vasocostrizione, la proliferazione della muscolatura liscia e il rimodellamento della matrice extracellulare. La segnalazione di ETAR si accoppia principalmente a Gq/11 per attivare la fosfolipasi C, la mobilizzazione di Ca2+ e la PKC, con il successivo coinvolgimento delle vie MAPK/ERK, RhoA/ROCK e PI3K/AKT, che modulano il tono vascolare e il rimodellamento tissutale. Durante lo sviluppo, Ednra è essenziale per la definizione dei pattern cranio-facciali e cardiovascolari derivati dalla cresta neurale, e la sua deregolazione viene utilizzata per modellare i meccanismi alla base di ipertensione polmonare, fibrosi e rimodellamento vascolare infiammatorio. Queste caratteristiche rendono Ednra/ETAR un nodo utile per studiare l’integrazione dei segnali dei GPCR, i programmi genici contrattili e il cross-talk della via dell’endotelina in sistemi cellulari endoteliali, di muscolatura liscia e stromali.

Le particelle di attivazione lentivirale ETAR (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Ednra in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ETAR (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Ednra, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ETAR. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Ednra e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.