Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Espin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403106
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Espin El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Espin, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Espin Anticuerpo (E-7): sc-393469
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Espin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-403106 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
ESPN codifica espina, una proteína que agrupa (hace haces de) filamentos de actina y se localiza en haces paralelos de filamentos de actina, estando enriquecida en microvellosidades y estereocilios. La espina regula la arquitectura del citoesqueleto, incluida la elongación y estabilización de protrusiones, dando forma así a la morfología de la superficie celular y a estructuras mecanosensoriales. Mediante la modulación de la dinámica de la actina y su entrecruzamiento, la espina influye en procesos como la organización del borde en cepillo epitelial y el mantenimiento de los estereocilios de las células ciliadas. La alteración de la función de ESPN se ha asociado con fenotipos sensoriales y del citoesqueleto relevantes para la biología de la audición y trastornos estructurales impulsados por la actina.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Espin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ESPN en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ESPN junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ESPN tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Espin.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ESPN para la investigación de la señalización de Espin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de ESPN críticos para la función de Espin
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ESPN para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Espin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Espin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ESPN. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Espin (h) y el plásmido HDR Espin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ESPN para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ESPN definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.