Plasmide CRISPR d'Activation (h) ERK 5: sc-400891-ACT

MAPK7 code pour ERK5, une kinase MAP atypique qui intègre des signaux issus des facteurs de croissance, des cytokines et du stress cellulaire afin de réguler des programmes transcriptionnels contrôlant la prolifération, la différenciation et la survie. ERK5 est activée en aval de MEK5 et module des cibles telles que les facteurs de transcription de la famille MEF2, reliant la signalisation MAPK à la fonction endothéliale, au remodelage du cytosquelette et aux réponses au stress mécanique ou oxydatif. Grâce à son activité kinase et à son domaine C-terminal unique d’activation transcriptionnelle, ERK5 influence la progression du cycle cellulaire et l’expression de gènes associés à la migration. Une signalisation MAPK7/ERK5 dérégulée a été associée à des altérations de la signalisation angiogénique et au recâblage de voies oncogéniques dans de multiples contextes tumoraux, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques sur la diaphonie (crosstalk) des réseaux MAPK.

ERK 5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MAPK7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ERK 5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MAPK7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MAPK7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ERK 5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MAPK7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ERK 5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ERK 5 dans les cellules tumorales présentant une expression de MAPK7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.