Erg Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-420226-ACT

Erg murino codifica un fattore di trascrizione della famiglia ETS che si lega ai motivi core GGAA/T per regolare programmi genici che controllano la specificazione endoteliale, la stabilità vascolare e il mantenimento delle cellule staminali e progenitrici ematopoietiche. Erg integra segnali provenienti da vie angiogeniche e sensibili alle citochine, incluse le reti trascrizionali endoteliali guidate da VEGF e la regolazione dell’output trascrizionale mediata da MAPK/PI3K. L’attività deregolata di ERG è ampiamente studiata nei circuiti trascrizionali oncogenici, in particolare nelle neoplasie ematologiche e nei contesti di fusioni guidate da ETS, in cui l’alterata espressione dei geni bersaglio influenza proliferazione, differenziamento e identità cellulare. Nei sistemi murini, Erg è spesso utilizzato per modellare l’impegno di linea, la biologia vascolare e la dipendenza da fattori di trascrizione nello sviluppo normale e in stati cellulari rilevanti per la malattia.

Erg Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Erg senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Erg Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Erg nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Erg, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Erg. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Erg nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Erg nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Erg nelle cellule tumorali con espressione di Erg silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.