ErbB2/HER2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400138-LAC

ERBB2 codifica il recettore tirosin-chinasico ErbB2/HER2, un membro “orfano” di ligando della famiglia EGFR/ErbB che funge da partner preferenziale di eterodimerizzazione per amplificare la segnalazione dei fattori di crescita. In seguito alla dimerizzazione, HER2 attiva le cascate a valle PI3K–AKT–mTOR e RAS–RAF–MEK–ERK, coordinando programmi di proliferazione, sopravvivenza, differenziamento e metabolismo. La segnalazione di ERBB2 interagisce anche con le reti SRC/FAK e di adesione cellula-cellula, influenzando la dinamica del citoscheletro e il comportamento migratorio. Un’espressione deregolata di ERBB2 o l’iperattivazione della via sono fortemente associate alla trasformazione oncogenica e sono ampiamente studiate come determinanti della fitness delle cellule tumorali e della plasticità di segnalazione in molteplici contesti tissutali.

Le particelle di attivazione lentivirale ErbB2/HER2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ERBB2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ErbB2/HER2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ERBB2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ErbB2/HER2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ERBB2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.