Plásmido CRISPR de Activación (m) ErbB2/HER2: sc-420218-ACT

El gen Erbb2 de ratón codifica la tirosina cinasa receptora ErbB2/HER2, un miembro de la familia EGFR/ErbB que actúa como socio preferente de heterodimerización para amplificar la señalización de factores de crecimiento. Tras su activación, ErbB2 activa las vías MAPK/ERK y PI3K–AKT para regular la proliferación, la supervivencia, el metabolismo y la diferenciación, con efectos adicionales sobre la adhesión y la motilidad celular. En el epitelio mamario y en otros tejidos, la señalización de ErbB2 contribuye al patrón del desarrollo y a la homeostasis tisular, y su desregulación se utiliza ampliamente como modelo de señalización oncogénica y de alteraciones en el tráfico del receptor. Dado que ErbB2 carece de un ligando soluble conocido, su actividad suele estudiarse mediante cambios en los niveles de expresión, la composición de dímeros y las redes de fosforilación aguas abajo.

ErbB2/HER2 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Erbb2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ErbB2/HER2 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Erbb2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Erbb2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ErbB2/HER2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Erbb2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ErbB2/HER2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ErbB2/HER2 en células tumorales con expresión de Erbb2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.