ephrin-A5 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-420123-ACT

Efna5 は、EphA 受容体のグリコシルホスファチジルイノシトール（GPI）アンカー型リガンドであるエフリンA5をコードしており、接触依存的な細胞間シグナル伝達を介して、軸索誘導、神経細胞の移動、シナプス構築を制御します。エフリンA5–Eph による順行性／逆行性シグナルは、Rho ファミリーGTPアーゼを通じた細胞骨格リモデリングを協調させ、さらに MAPK/ERK 経路や PI3K 関連経路とも交差して、接着、反発、組織境界の形成を調節します。マウスの系では、Efna5 の活性は神経回路の組み立て、網膜マッピング、発生パターニングの機構をモデル化するために広く用いられています。エフリン／Eph シグナルの破綻は、神経発達に関連する表現型や、がん生物学および血管新生研究の文脈で重要となる異常な細胞運動プログラムに関与すると示唆されています。

ephrin-A5 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Efna5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ephrin-A5 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Efna5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEfna5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ephrin-A5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEfna5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるephrin-A5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEfna5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるephrin-A5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。