EPCR Double Nickaseプラスミド (h): sc-402158-NIC

PROCRは、血管内皮に主として発現するI型膜貫通性糖タンパク質である内皮プロテインC受容体（EPCR）をコードしており、プロテインCおよび活性化プロテインCに結合して、抗凝固および細胞保護的シグナル伝達を細胞表面に局在化させます。EPCRは、トロンボモジュリン‐トロンビンによるプロテインC活性化と協調し、内皮バリア機能、炎症、白血球トラフィッキングに影響するプロテアーゼ活性化受容体（PAR）依存性経路も支持します。EPCRの発現変化やシェディング（細胞表面からの切断・遊離）は止血バランスと血管恒常性を乱し得るため、PROCRの生物学は血栓症、炎症性血管障害、内皮機能障害と関連づけられています。明確なリガンド相互作用をもつ表面受容体として、EPCRは細胞モデルや血管モデルにおける凝固‐炎症クロストークの機序的指標（読み出し）としても用いられます。

EPCR ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における PROCR 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、PROCR内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、PROCRの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、PROCRが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。