Eos Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402330

Panoramica

IKZF4 (Eos) è un fattore di trascrizione a dita di zinco della famiglia Ikaros che regola programmi di espressione genica coinvolti nel controllo della differenziazione, dell’attivazione e della tolleranza dei linfociti. Nelle cellule T umane, Eos è espresso in modo marcato nelle cellule T regolatorie e contribuisce al mantenimento dell’identità soppressiva coordinando la repressione trascrizionale e il controllo, associato alla cromatina, dei geni effettrici immunitari. Attraverso l’integrazione con reti trascrizionali ed epigenetiche, IKZF4 influenza la risposta ai segnali delle citochine, gli stati di attivazione guidati dal TCR e la stabilità di linea. Una funzione disregolata di IKZF4/Eos è stata associata ad alterazioni dell’omeostasi immunitaria ed è stata studiata in contesti di autoimmunità, infiammazione e immuno-oncologia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Eos (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene IKZF4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del IKZF4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto IKZF4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Eos.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di IKZF4 per lo studio della segnalazione di Eos, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni IKZF4 critici per la funzione di Eos
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di IKZF4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Eos CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Eos CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus IKZF4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Eos Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Eos (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia IKZF4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio IKZF4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.