ENX-1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-417028-LAC

EZH2 codifica ENX-1, la subunità catalitica del Complesso Repressivo Polycomb 2 (PRC2), che trimetila l’istone H3 in Lys27 (H3K27me3) per instaurare la repressione trascrizionale e la compattazione della cromatina. Attraverso il silenziamento epigenetico di geni associati al destino di linea e al ciclo cellulare, ENX-1 regola lo sviluppo, l’identità delle cellule staminali, la differenziazione e il mantenimento della memoria cellulare. L’attività di EZH2 si integra con la regolazione Polycomb/Trithorax, il rimodellamento della cromatina e il crosstalk con la metilazione del DNA e con vie di segnalazione che modellano i programmi trascrizionali. L’espressione o la funzione deregolata di EZH2 è spesso oggetto di studio in biologia dei tumori, nella regolazione immunitaria e nei processi di neurosviluppo, per via del suo ampio impatto sugli stati di espressione genica.

Le particelle di attivazione lentivirale ENX-1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di EZH2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ENX-1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione EZH2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ENX-1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo EZH2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.