Plasmide CRISPR/Cas9 KO endobrevin (h): sc-403438

Présentation

VAMP8 code l’endobrévine, une protéine SNARE associée aux vésicules qui médie des événements de fusion membranaire essentiels à l’exocytose régulée et au trafic endocytique. Elle participe à l’assemblage de complexes SNARE avec des syntaxines partenaires et des protéines SNAP afin de permettre l’amarrage et la fusion des vésicules, soutenant des processus tels que la sécrétion de granules, la fusion phagosome–lysosome et le transport vers les endosomes tardifs/lysosomes. Dans des contextes immunitaires et épithéliaux, la dynamique vésiculaire dépendante de VAMP8 influence la sécrétion liée à l’inflammasome et les fonctions de barrière muqueuse, reliant son dérèglement à des phénotypes inflammatoires et à une réponse hôte–pathogène altérée. Une perturbation de l’endobrévine peut également remodeler le recyclage des récepteurs et les voies de dégradation, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de l’atténuation des signaux, du traitement des antigènes et des réponses au stress cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO endobrevin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène VAMP8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du VAMP8, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert VAMP8 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine endobrevin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en VAMP8 pour l'étude de la signalisation de endobrevin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de VAMP8 essentiels à la fonction de endobrevin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de VAMP8 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le endobrevin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le endobrevin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus VAMP8. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le endobrevin plasmide HDR (h) et le endobrevin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie VAMP8 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles VAMP8 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.