Elongin A3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-418260

Panoramica

TCEB3C codifica l’Elongin A3 umano, un membro del complesso dei fattori di elongazione trascrizionale Elongin che поддержisce la processività della RNA polimerasi II e coordina la trascrizione con il controllo di qualità co-trascrizionale. Le proteine della famiglia Elongin interagiscono con meccanismi regolatori dipendenti dall’ubiquitina e contribuiscono a plasmare programmi cellulari legati alle risposte allo stress, alla proteostasi e al controllo del ciclo cellulare. In quanto fattore associato alla trascrizione, Elongin A3 è rilevante per studi sulla regolazione dell’espressione genica e sulle vie di segnalazione legate alla cromatina che influenzano proliferazione e differenziamento. La disregolazione dell’elongazione trascrizionale e del controllo mediato dall’ubiquitina è spesso implicata in processi oncogenici e neurodegenerativi, rendendo TCEB3C un locus utile per indagini meccanicistiche in modelli pertinenti alla malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Elongin A3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TCEB3C in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TCEB3C insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TCEB3C a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Elongin A3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TCEB3C per lo studio della segnalazione di Elongin A3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TCEB3C critici per la funzione di Elongin A3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TCEB3C per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Elongin A3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Elongin A3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TCEB3C. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Elongin A3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Elongin A3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TCEB3C per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TCEB3C definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.