elastin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h2): sc-400640-KO-2

Panoramica

L’ELN umano codifica l’elastina, una proteina della matrice extracellulare altamente reticolata che conferisce elasticità e capacità di ritorno elastico alle fibre elastiche di arterie, polmone e cute. L’assemblaggio dell’elastina coinvolge impalcature microfibrillari e la reticolazione mediata dalla lisil ossidasi, sostenendo la compliance vascolare e la meccanica dei tessuti e influenzando il comportamento cellulare attraverso la segnalazione matrice–integrina e le vie di meccanotrasduzione. L’alterazione di ELN compromette la formazione delle fibre elastiche e l’omeostasi della matrice extracellulare, modificando il fenotipo delle cellule muscolari lisce e l’organizzazione del tessuto connettivo. La disfunzione di ELN è associata a disturbi dell’integrità vascolare e del tessuto connettivo, tra cui la stenosi aortica sopravalvolare, la cutis laxa e altre arteriopatie correlate all’elastina.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO elastin (h2) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ELN in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ELN insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ELN a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina elastin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ELN per lo studio della segnalazione di elastin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ELN critici per la funzione di elastin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ELN per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal elastin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal elastin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ELN. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal elastin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR elastin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ELN per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ELN definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.