eIF4G Plasmide Double Nickase (h): sc-400661-NIC

EIF4G1 codifica la proteina di impalcatura eIF4G umana, un componente centrale del complesso eIF4F che coordina l’avvio della traduzione dell’mRNA cap-dipendente collegando eIF4E, eIF4A, PABP e la subunità ribosomiale 40S tramite eIF3. Organizzando l’assemblaggio del complesso di pre-inizio e favorendo il reclutamento dell’mRNA e lo scanning, eIF4G integra segnali di crescita e di stress che modulano l’output traduttivo, incluse vie associate alla sintesi proteica regolata da mTOR e alla proteostasi cellulare. La disregolazione dell’inizio della traduzione e l’alterata funzione di EIF4G1 sono state studiate nel contesto di fenotipi neurodegenerativi e, più in generale, della biologia della risposta allo stress, in cui cambiamenti nella traduzione selettiva di specifici mRNA possono rimodellare i programmi di stato cellulare. In quanto nodo del controllo traduttivo, EIF4G1 è spesso utilizzato per indagare i meccanismi che collegano il metabolismo dell’RNA, l’omeostasi proteica e il rimodellamento del proteoma dipendente dalla segnalazione.

eIF4G Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EIF4G1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EIF4G1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EIF4G1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EIF4G1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.