eIF4E2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403245-ACT

EIF4E2 codifica eIF4E2 (nota anche come 4EHP), un fattore di inizio della traduzione che si lega al cappuccio (cap) e modula la sintesi proteica selettiva di specifici mRNA competendo con eIF4E e associandosi a repressori per controllare la traduzione cap-dipendente. eIF4E2 contribuisce alla regolazione post-trascrizionale durante le risposte allo stress, la differenziazione e l’ipossia, influenzando la stabilità degli mRNA e l’output traduttivo in vie legate al rilevamento dell’ossigeno e all’adattamento cellulare. Attraverso interazioni con proteine leganti l’RNA e complessi associati ai microRNA, modella programmi di espressione genica che incidono sul controllo del ciclo cellulare, sul metabolismo e sulla sopravvivenza. Una regolazione aberrante del controllo traduttivo mediato da eIF4E2 è stata implicata in contesti rilevanti per la biologia dei tumori e altre patologie in cui sono prominenti una sintesi proteica anomala e la segnalazione da stress.

eIF4E2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di EIF4E2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

eIF4E2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus EIF4E2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione EIF4E2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di eIF4E2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus EIF4E2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da eIF4E2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via eIF4E2 nelle cellule tumorali con espressione di EIF4E2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.