eIF4E Plasmide Double Nickase (h): sc-400415-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- eIF4E Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il eIF4E Double Nickase Plasmid (h) e il eIF4E Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira EIF4E. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: eIF4E Antibody (P-2): sc-9976
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
eIF4E Plasmide Double Nickase (h) | sc-400415-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
eIF4E Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400415-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EIF4E codifica eIF4E, la subunità del complesso di inizio della traduzione eIF4F che si lega al cappuccio e riconosce il cap 7-metilguanosina degli mRNA, favorendo il reclutamento dei ribosomi per avviare la sintesi proteica. L’attività di eIF4E integra segnali delle vie PI3K–AKT–mTOR e MAPK tramite la regolazione da parte delle proteine 4E-BP e la fosforilazione dipendente da MNK, collegando i segnali di crescita alla traduzione selettiva di trascritti coinvolti in proliferazione, sopravvivenza e risposte allo stress. Un’espressione deregolata di EIF4E o un controllo alterato della sua segnalazione è associato a un’errata riprogrammazione della traduzione nella biologia dei tumori ed è stata implicata anche in studi sul neurosviluppo e sulle interazioni virus-ospite. In quanto nodo centrale della traduzione cap-dipendente, EIF4E è ampiamente utilizzato per studiare il controllo traduzionale, la selezione degli mRNA e fenotipi legati alla proteostasi in modelli cellulari umani.
eIF4E Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EIF4E nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EIF4E. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EIF4E. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EIF4E interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.