Plásmido Doble Nickase (h) eIF4E: sc-400415-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)eIF4E consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa eIF4E (h) y el plásmido de doble nickasa eIF4E (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a EIF4E. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: eIF4E Anticuerpo (P-2): sc-9976
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) eIF4E | sc-400415-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) eIF4E | sc-400415-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EIF4E codifica eIF4E, la subunidad de unión al cap del complejo de iniciación de la traducción eIF4F, que reconoce el cap 7‑metilguanosina de los ARNm y favorece el reclutamiento de ribosomas para iniciar la síntesis proteica. La actividad de eIF4E integra señales de las vías PI3K–AKT–mTOR y MAPK mediante su regulación por las proteínas 4E‑BP y la fosforilación dependiente de MNK, acoplando las señales de crecimiento a la traducción selectiva de transcritos implicados en proliferación, supervivencia y respuestas al estrés. La desregulación de la expresión de EIF4E o de su control por señalización se asocia con una reprogramación translacional aberrante en la biología del cáncer y también se ha implicado en estudios de neurodesarrollo y de interacciones virus‑huésped. Como nodo central de la traducción dependiente de cap, EIF4E se utiliza ampliamente para investigar el control translacional, la selección de ARNm y fenotipos relacionados con la proteostasis en modelos celulares humanos.
eIF4E El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EIF4E en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EIF4E. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EIF4E. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EIF4E alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.