EGR1 Particelle di Attivazione Lentivirale (r): sc-437290-LAC

EGR1 (early growth response 1) è un fattore di trascrizione immediate-early rapidamente indotto da segnali mitogeni e di stress, e agisce come regolatore centrale dei programmi di espressione genica dipendenti dallo stimolo nelle cellule di ratto. Integra input a monte dalle vie MAPK/ERK, PKC, dalla segnalazione del calcio e dalle vie dei fattori di crescita per controllare la trascrizione legata alla progressione del ciclo cellulare, alla differenziazione, all’apoptosi e alla plasticità sinaptica. EGR1 modula reti a valle coinvolte nel rimodellamento della matrice extracellulare, nella segnalazione di citochine e chemochine e nell’attività vascolare e neuronale, risultando quindi ampiamente rilevante per modelli di infiammazione, fibrosi e neuroadattamento. Un’attività di EGR1 deregolata è stata associata a fenotipi proliferativi e di risposta allo stress alterati in diversi contesti rilevanti per la malattia, a supporto della sua utilità come nodo meccanicistico per l’analisi delle vie di segnalazione.

Le particelle di attivazione lentivirale EGR1 (r) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale EGR1 (r) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione , dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di EGR1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.