Plasmide CRISPR d'Activation (h) Egr-2: sc-401203-ACT

EGR2 code le facteur de transcription à doigts de zinc Egr-2, un gène de réponse immédiate qui régule des programmes transcriptionnels dépendants des stimuli, contrôlant les décisions de destinée cellulaire, la différenciation et l’homéostasie tissulaire. Dans les systèmes immunitaire et nerveux humains, Egr-2 contribue à des réseaux transcriptionnels qui façonnent l’anergie/la tolérance des lymphocytes T et le développement des nerfs périphériques, en intégrant des signaux en aval de MAPK/ERK et d’autres voies dépendantes de l’activité. Une expression ou une fonction altérée d’EGR2 a été associée à une dérégulation immunitaire et à des phénotypes de neuropathie périphérique, ce qui en fait un nœud utile pour étudier le contrôle transcriptionnel de l’inflammation et des processus liés à la myélinisation. En tant que régulateur se liant à l’ADN, Egr-2 constitue un modèle exploitable pour disséquer la logique des promoteurs/activateurs (enhancers) et les circuits de régulation génique en aval dans des types cellulaires pertinents pour la maladie.

Egr-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de EGR2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Egr-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus EGR2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription EGR2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Egr-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus EGR2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Egr-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Egr-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de EGR2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.