EGFL7 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-436135-ACT

Egfl7は、上皮成長因子様ドメイン7（EGFL7）をコードしています。EGFL7は分泌型の細胞外マトリックス関連タンパク質で、内皮細胞に高発現し、血管発生および血管新生に伴うリモデリングを支持します。EGFL7は内皮細胞の遊走、管腔形成、血管の安定化に関与し、発芽性血管新生におけるNotch経路活性への影響を含め、細胞—細胞間および細胞—マトリックス間シグナル伝達の調節と関連づけられています。マウスモデルでは、Egfl7発現の変化が血管パターニングや内皮細胞の挙動を乱し、虚血性損傷応答や腫瘍関連新生血管形成に関わる経路において本遺伝子が関与することが示唆されています。EGFL7の発現異常は、内皮機能障害が疾患表現型に寄与する炎症性微小環境や組織リモデリングの文脈でも研究されています。

EGFL7 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Egfl7の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

EGFL7 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Egfl7 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEgfl7転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性EGFL7の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEgfl7遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEGFL7依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEgfl7発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEGFL7経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。