EGFL6 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-411850-LAC

EGFL6 codifica una proteina secreta associata alla matrice extracellulare appartenente alla famiglia delle proteine EGF-like, che contribuisce alle interazioni cellula–matrice e alla segnalazione del microambiente. EGFL6 è stato associato alla regolazione del comportamento delle cellule endoteliali ed epiteliali, inclusi migrazione, adesione e sopravvivenza, in linea con ruoli nel rimodellamento tissutale e in processi legati all’angiogenesi. Attraverso i suoi domini EGF-like, EGFL6 può modulare reti di segnalazione che si intersecano con vie mediate dalle integrine e con programmi responsivi ai fattori di crescita che influenzano la dinamica del citoscheletro. Un’espressione deregolata di EGFL6 è stata riportata in diversi contesti patologici, supportandone l’uso come strumento molecolare per studiare il rimodellamento vascolare, la biologia del microambiente tumorale e i fenotipi di motilità cellulare in sistemi modello umani.

Le particelle di attivazione lentivirale EGFL6 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di EGFL6 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale EGFL6 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione EGFL6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di EGFL6. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo EGFL6 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.