Plásmido CRISPR de Activación (h) EDIL3: sc-404813-ACT

EDIL3 (repeticiones tipo EGF y dominios similares a discoidina I 3), también conocido como DEL-1, codifica una glucoproteína secretada asociada a la matriz extracelular que modula la adhesión y migración celular, así como la remodelación tisular, mediante interacciones dependientes de integrinas. En células humanas, EDIL3 participa en la regulación del comportamiento endotelial y de señales extracelulares que configuran microambientes angiogénicos e inflamatorios, influyendo en la dinámica leucocito–endotelio y en la organización de la matriz. Se ha informado de una expresión desregulada de EDIL3 en contextos de remodelación vascular y en el estroma asociado a tumores, lo que respalda su relevancia para estudios de angiogénesis, regulación inmunitaria y biología del nicho metastásico. Estas propiedades hacen de EDIL3 una diana útil para analizar la señalización de la matriz extracelular, la interconexión entre vías de integrinas y los fenotipos impulsados por el microambiente.

EDIL3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de EDIL3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

EDIL3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus EDIL3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional EDIL3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de EDIL3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo EDIL3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de EDIL3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía EDIL3 en células tumorales con expresión de EDIL3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.