Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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EDG-5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420642
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- EDG-5 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico EDG-5, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: EDG-5 Antibody (E-12): sc-365963
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
EDG-5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-420642 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
S1pr2 codifica EDG-5 (recettore 2 della sfingosina-1-fosfato), un GPCR che lega il lipide bioattivo sfingosina-1-fosfato per regolare la migrazione cellulare, il rimodellamento del citoscheletro e le proprietà della barriera vascolare. EDG-5 segnala attraverso proteine G eterotrimeriche per attivare nodi delle vie RhoA/ROCK, MAPK/ERK e PI3K-AKT, modulando la dinamica dell’adesione, i segnali proliferativi e le risposte infiammatorie. Nei sistemi murini, l’attività di S1pr2 è stata collegata al traffico di cellule endoteliali e immunitarie, al rimodellamento associato alla fibrosi e a un controllo dipendente dal contesto dell’invasione delle cellule tumorali e del comportamento metastatico. Una segnalazione S1P–S1PR2 deregolata è quindi rilevante per studi su infiammazione, disfunzione vascolare e risposte al danno tissutale.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO EDG-5 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene S1pr2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del S1pr2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto S1pr2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina EDG-5.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di S1pr2 per lo studio della segnalazione di EDG-5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni S1pr2 critici per la funzione di EDG-5
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di S1pr2 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal EDG-5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal EDG-5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus S1pr2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal EDG-5 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR EDG-5 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia S1pr2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio S1pr2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.