Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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EAP1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-408947
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- EAP1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico EAP1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: EAP1 Antibody (C-9): sc-514772
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
EAP1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-408947 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
IRF2BPL codifica EAP1, una proteina nucleare con dominio RING finger implicata nel controllo della trascrizione e nella regolazione, dipendente dall’ubiquitina, della stabilità proteica. EAP1 è stata collegata alla modulazione di programmi di espressione genica che influenzano la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione e l’omeostasi neuronale, in linea con ruoli nella proteostasi e nella segnalazione responsiva allo stress. L’alterazione genetica di IRF2BPL è associata a fenotipi neuroevolutivi e neurodegenerativi, a supporto della sua rilevanza in vie che governano il mantenimento neuronale e la funzione sinaptica. Di conseguenza, IRF2BPL/EAP1 viene studiata nei meccanismi di regolazione trascrizionale, nel turnover legato all’ubiquitinazione e nella resilienza cellulare in sistemi modello umani.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO EAP1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene IRF2BPL in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del IRF2BPL insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto IRF2BPL a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina EAP1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di IRF2BPL per lo studio della segnalazione di EAP1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni IRF2BPL critici per la funzione di EAP1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di IRF2BPL per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal EAP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal EAP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus IRF2BPL. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal EAP1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR EAP1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia IRF2BPL per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio IRF2BPL definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.