E2A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423303

Panoramica

Tcf3 codifica il fattore di trascrizione E2A della famiglia basic helix–loop–helix (bHLH), un regolatore chiave dell’impegno di linea e dei programmi di differenziamento, in particolare nei compartimenti ematopoietico e linfoide. E2A forma dimeri che si legano ai motivi E-box per controllare reti geniche coinvolte nel controllo del ciclo cellulare, nell’apoptosi e nella tempistica dello sviluppo, e interseca funzionalmente i contesti di segnalazione Notch, Wnt/β-catenina e TGF-β. Nei modelli murini, un’alterazione dell’attività di Tcf3 perturba lo sviluppo delle cellule B e T e può rimodellare stati trascrizionali che influenzano il mantenimento delle cellule staminali/progenitrici. La disregolazione dei circuiti trascrizionali dipendenti da E2A è frequentemente studiata nel contesto delle reti oncogeniche di fattori di trascrizione e dei difetti di maturazione delle cellule immunitarie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO E2A (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tcf3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tcf3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tcf3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina E2A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tcf3 per lo studio della segnalazione di E2A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tcf3 critici per la funzione di E2A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tcf3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal E2A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal E2A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tcf3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal E2A Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR E2A (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tcf3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tcf3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.