Plásmido Doble Nickase (m) dystrophin: sc-420021-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)dystrophin consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa dystrophin (m) y el plásmido de doble nickasa dystrophin (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Dmd. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: dystrophin Anticuerpo (7A10): sc-47760
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) dystrophin | sc-420021-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) dystrophin | sc-420021-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen **Dmd** de ratón codifica la distrofina, una gran proteína de andamiaje del citoesqueleto que conecta el citoesqueleto de actina con el complejo de glicoproteínas asociadas a la distrofina en el sarcolema. Esta conexión estabiliza las membranas de las fibras musculares durante la contracción y favorece la mecanotransducción, la homeostasis iónica y la organización de los costámeros y de la arquitectura de la unión neuromuscular. La pérdida o disfunción de la distrofina altera la integridad de la membrana y modifica procesos posteriores de señalización y de remodelado inflamatorio en el músculo esquelético y cardíaco, lo que convierte a **Dmd** en un gen central para modelar in vivo y en miotubos cultivados la biología relevante de las distrofias musculares. Los estudios de **Dmd** suelen converger con vías que controlan el recambio de la matriz extracelular, el manejo del calcio y la señalización de respuesta al estrés en el músculo estriado.
dystrophin El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Dmd en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Dmd. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Dmd. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Dmd alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.