dystrophin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (porcine): sc-437292

Panoramica

La distrofina è una grande proteina del citoscheletro che collega la rete intracellulare di actina al complesso di glicoproteine associate alla distrofina (DGC) presente nel sarcolemma, stabilizzando le fibre muscolari durante la contrazione. Supporta l’integrità della membrana e la meccanotrasduzione nel muscolo scheletrico e cardiaco e influenza processi di segnalazione che coordinano la gestione del calcio, la segnalazione dell’ossido nitrico e le risposte cellulari allo stress. L’alterazione della distrofina compromette la resistenza del sarcolemma, causando danno alle miofibre, infiammazione e rimodellamento progressivo; è inoltre ampiamente utilizzata come punto di ingresso molecolare per lo studio dei meccanismi delle distrofie muscolari. Nei sistemi suini, la biologia della distrofina viene sfruttata per modellare lo sviluppo muscolare, l’architettura e le vie biologiche rilevanti per la malattia in un contesto di grande animale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO dystrophin (porcine) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene in linee cellulari porcine. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina dystrophin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di per lo studio della segnalazione di dystrophin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni critici per la funzione di dystrophin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal dystrophin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (porcine) e dal dystrophin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (porcine2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus . Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal dystrophin Plasmide HDR (porcine) e il plasmide HDR dystrophin (porcine2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.