Plásmido Doble Nickase (h) Dvl-3/Dishevelled 3/DVL3: sc-401041-NIC

DVL3 codifica Dishevelled 3 (Dvl-3), una proteína andamiaje citoplasmática que transduce señales Wnt al coordinar eventos proximales al receptor aguas abajo de Frizzled y LRP5/6. Dvl-3 participa tanto en la regulación transcripcional canónica de β-catenina/TCF como en las vías no canónicas de polaridad celular planar y Wnt/Ca²⁺, influyendo en la polaridad celular, la remodelación del citoesqueleto, la migración y el patrón del desarrollo. A través de estas salidas de señalización, DVL3 ayuda a controlar programas de proliferación y diferenciación, y se estudia con frecuencia en contextos en los que la señalización Wnt se reconfigura. La desregulación de la señalización dependiente de DVL3 se ha asociado con la activación de vías oncogénicas, fenotipos de invasión alterados y mecanismos más amplios de enfermedad del desarrollo y neurológica vinculados a un control perturbado de la vía Wnt.

Dvl-3/Dishevelled 3/DVL3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DVL3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DVL3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DVL3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DVL3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.