DTYMK Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423426

Panoramica

Dtymk codifica la deossitimidilato chinasi (DTYMK), un enzima citosolico essenziale che fosforila il dTMP a dTDP, mantenendo i pool di dTTP necessari per la replicazione e la riparazione del DNA. Collegando la sintesi de novo del timidilato con il recupero (salvage) dei nucleotidi, DTYMK supporta la progressione della fase S, la stabilità del genoma e il mantenimento del DNA mitocondriale e nucleare attraverso un’omeostasi bilanciata dei dNTP. Alterazioni nella disponibilità di dTTP possono aumentare lo stress replicativo e la segnalazione di danno al DNA, collegando la funzione di DTYMK alle vie che controllano i checkpoint del ciclo cellulare e l’integrità cromosomica. DTYMK è stato implicato in fenotipi proliferativi e di neurosviluppo in sistemi modello, rendendo Dtymk un nodo utile per studiare i meccanismi di malattia associati al metabolismo dei nucleotidi, senza implicare esiti clinici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DTYMK (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Dtymk in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Dtymk insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Dtymk a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DTYMK.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Dtymk per lo studio della segnalazione di DTYMK, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Dtymk critici per la funzione di DTYMK
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Dtymk per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal DTYMK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal DTYMK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Dtymk. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal DTYMK Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR DTYMK (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Dtymk per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Dtymk definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.