Plasmide CRISPR/Cas9 KO DTYMK (m): sc-423426

Présentation

Dtymk code la désoxythymidylate kinase (DTYMK), une enzyme cytosolique essentielle qui phosphoryle le dTMP en dTDP, maintenant les réserves de dTTP nécessaires à la réplication et à la réparation de l’ADN. En reliant la synthèse de novo du thymidylate à la voie de récupération des nucléotides, DTYMK soutient la progression de la phase S, la stabilité du génome et l’entretien de l’ADN mitochondrial et nucléaire grâce à une homéostasie équilibrée des dNTP. Une perturbation de la disponibilité en dTTP peut accroître le stress réplicatif et activer la signalisation des dommages à l’ADN, reliant la fonction de DTYMK aux voies qui contrôlent les points de contrôle du cycle cellulaire et l’intégrité chromosomique. DTYMK a été impliquée dans des phénotypes prolifératifs et neurodéveloppementaux dans des systèmes modèles, faisant de Dtymk un nœud utile pour étudier les mécanismes pathologiques associés au métabolisme des nucléotides, sans préjuger d’issues cliniques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DTYMK (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Dtymk dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Dtymk, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Dtymk à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DTYMK.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Dtymk pour l'étude de la signalisation de DTYMK, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Dtymk essentiels à la fonction de DTYMK
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Dtymk pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DTYMK plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le DTYMK plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Dtymk. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DTYMK plasmide HDR (m) et le DTYMK (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Dtymk pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Dtymk définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.