DPF2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404801-ACT

DPF2 (auch als REQU bekannt) kodiert ein Zinkfingerprotein, das als epigenetischer „Reader“ in ATP‑abhängigen Chromatin‑Remodeling‑Komplexen fungiert, darunter SWI/SNF (BAF/PBAF). Über seine PHD‑Finger erkennt DPF2 Modifikationen an Histonschwänzen und trägt dazu bei, Nukleosomen‑Remodeling‑Programme zu koordinieren, die die Transkriptionskontrolle, die Linienfestlegung und die stimuli‑abhängige Genexpression beeinflussen. DPF2 wurde mit der Regulation der NF‑κB‑assoziierten Transkription sowie einer umfassenderen, chromatinbasierten Kontrolle von Zellproliferation und -differenzierung in Verbindung gebracht. Eine fehlregulierte Aktivität des SWI/SNF‑Signalwegs und veränderte Chromatin‑Reader‑Funktionen unter Beteiligung von DPF2 sind wiederkehrende Themen in der Biologie von Krebs und entzündlichen Erkrankungen und machen DPF2 zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Untersuchungen transkriptioneller Schaltkreise.

DPF2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen DPF2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

DPF2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des DPF2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der DPF2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen DPF2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native DPF2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von DPF2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des DPF2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem DPF2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.