DOCK 8 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401727

Descripción general

DOCK8 codifica un factor de intercambio de nucleótidos de guanina que activa GTPasas de la familia Rho, coordinando la remodelación del citoesqueleto de actina necesaria para la migración y adhesión de las células inmunitarias, así como para la formación de la sinapsis inmunológica. DOCK8 favorece la supervivencia y la señalización de los linfocitos, influyendo en procesos como la quimiotaxis, la activación impulsada por antígenos y la función efectora citotóxica. La alteración de DOCK8 se asocia a fenotipos de inmunodeficiencia primaria caracterizados por respuestas antivirales deterioradas, inflamación alérgica y mayor susceptibilidad a neoplasias, lo que subraya su papel central en la homeostasis inmunitaria. En estudios mecanísticos, DOCK8 se examina con frecuencia en vías que controlan la dinámica del citoesqueleto, la polaridad celular y la estabilidad de la sinapsis inmunológica en células T, células B, células NK y células dendríticas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO DOCK 8 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DOCK8 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DOCK8 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DOCK8 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DOCK 8.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DOCK8 para la investigación de la señalización de DOCK 8, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de DOCK8 críticos para la función de DOCK 8
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DOCK8 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido DOCK 8 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido DOCK 8 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DOCK8. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DOCK 8 (h) y el plásmido HDR DOCK 8 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DOCK8 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DOCK8 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.