Dnmt3a Plasmide Double Nickase (m): sc-420035-NIC

Dnmt3a del topo codifica una DNA metiltransferasi de novo che stabilisce i pattern di metilazione delle CpG durante lo sviluppo precoce e la specificazione di linea, plasmando programmi stabili di espressione genica e stati della cromatina. DNMT3A opera all’interno di reti di silenziamento epigenetico che si interfacciano con le modifiche istoniche e l’occupazione dei fattori di trascrizione per regolare differenziamento, imprinting e repressione dei trasposoni. L’alterazione di Dnmt3a compromette l’integrità del metiloma e le decisioni sul destino cellulare, rendendolo un nodo chiave per lo studio della memoria epigenetica, della biologia delle cellule staminali e della regolazione ematopoietica. L’attività alterata di DNMT3A è ampiamente utilizzata come punto d’ingresso meccanicistico per modellare la disregolazione associata alla metilazione osservata nel cancro e nei disturbi dello sviluppo.

Dnmt3a Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Dnmt3a nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Dnmt3a. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Dnmt3a. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Dnmt3a interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.